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凱杰Qiagen微量樣本全基因組擴(kuò)增試劑盒

• 型   號(hào)：150025
• 價(jià)   格：
• 更新時(shí)間：2024-11-07
• 廠家性質(zhì)：經(jīng)銷商

150025 凱杰Qiagen微量樣本全基因組擴(kuò)增試劑盒REPLI-G Kits 100T/盒，產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品品牌：Qiagen
產(chǎn)品貨號(hào)：150025
產(chǎn)品名稱：微量樣本全基因組擴(kuò)增試劑盒
英文名稱：REPLI-G Kits
產(chǎn)品規(guī)格：100T/盒

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凱杰Qiagen150025微量樣本全基因組擴(kuò)增試劑盒REPLI-G Kits 100T/盒

凱杰QIAGEN在生命科學(xué)研究、應(yīng)用檢測(cè)、制藥、和分子診斷領(lǐng)域獲得成功和突破性進(jìn)展。

150025 凱杰Qiagen微量樣本全基因組擴(kuò)增試劑盒REPLI-G Kits 100T/盒，產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品品牌：Qiagen
產(chǎn)品貨號(hào)：150025
產(chǎn)品名稱：微量樣本全基因組擴(kuò)增試劑盒
英文名稱：REPLI-G Kits
產(chǎn)品規(guī)格：100T/盒

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150025 凱杰Qiagen微量樣本全基因組擴(kuò)增試劑盒REPLI-G Kits 100T/盒，產(chǎn)品說(shuō)明：

DNA Polymerase, Buffers, and Reagents for 100 x 50 µl whole genome amplification reactions (typical yield 10 µg per reaction)

用于 100 x 50 μl 全基因組擴(kuò)增反應(yīng)的 DNA 聚合酶、緩沖液和試劑（每次反應(yīng)的典型產(chǎn)量為 10 μg）

特征

l  擴(kuò)增的 DNA 可用于 NGS、微陣列和 PCR 應(yīng)用

l  等溫多重位移擴(kuò)增 （MDA） 與校對(duì) DNA 聚合酶

l  全基因組擴(kuò)增 （WGA） 可從 10 ng DNA 中產(chǎn)生 7 至 40 μg 擴(kuò)增的 DNA

l  超快格式，可在 1–1.5 小時(shí)內(nèi)完成全基因組擴(kuò)增

l  適用于 96 個(gè)樣品的高通量形式，處理時(shí)間僅為 20 分鐘

產(chǎn)品詳情

由于基因組DNA數(shù)量不足而可以進(jìn)行的基因組分析的數(shù)量和類型的限制可以通過(guò)對(duì)樣本中所有DNA進(jìn)行全局?jǐn)U增（全基因組擴(kuò)增）來(lái)克服。REPLI-g 試劑盒提供 DNA 聚合酶、緩沖液和試劑，用于高度均勻的全基因組擴(kuò)增，序列偏差*小，可與各種起始材料一起使用，包括基因組 DNA、新鮮或干燥血液、口腔拭子、新鮮或冷凍組織和細(xì)胞。QIAGEN REPLI-g試劑盒有幾種不同的尺寸和配置，使研究人員能夠?yàn)槠鋺?yīng)用和實(shí)驗(yàn)室空間構(gòu)建優(yōu)良工作流程。典型的 REPLI-g 產(chǎn)量范圍約為 7 μg 至 40 μg 擴(kuò)增 DNA，具體取決于所使用的試劑盒和工作流程。

REPLI-g Mini 和 Midi 試劑盒提供單管工作流程，具有更高的擴(kuò)增 DNA 產(chǎn)量，而 REPLI-g UltraFast 試劑盒可在短短 60–90 分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)高度均勻和準(zhǔn)確的全基因組擴(kuò)增。對(duì)于 96 孔形式的高通量處理，REPLI-g 篩選試劑盒的簡(jiǎn)化室溫程序可實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單的液體處理，僅需 20 分鐘。REPLI-g 篩選試劑盒旨在使用一系列基因分型、PCR、測(cè)序或微陣列檢測(cè)進(jìn)行快速篩選。

Performance

各種樣品的高產(chǎn)量，適用于多種應(yīng)用

各種臨床和非臨床研究樣品可與 REPLI-g 迷你和中型試劑盒一起使用，包括基因組 DNA、新鮮或干燥血液、新鮮或冷凍組織和細(xì)胞。每 50 μl 反應(yīng)的典型 DNA 產(chǎn)量始終達(dá)到 10 μg（迷你試劑盒）或 40 μg（中型試劑盒），而無(wú)論模板DNA的數(shù)量如何，通常都能實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增DNA的均勻產(chǎn)量，從不同的模板濃度中獲得均勻的DNA產(chǎn)量始終很重要，但對(duì)于高通量應(yīng)用尤其重要，這需要后續(xù)的遺傳分析，而無(wú)需額外測(cè)量或調(diào)整DNA濃度。

對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量樣品，REPLI-g 超快迷你試劑盒的平均 DNA 產(chǎn)量為 90 分鐘內(nèi)每 20 μl 反應(yīng) 7–10 μg。如果時(shí)間非常有限，只需45分鐘即可獲得足夠的產(chǎn)品進(jìn)行下游遺傳分析，陰性對(duì)照樣品（無(wú)模板DNA）不會(huì)擴(kuò)增，從而提供樣品存在/不存在或污染DNA的可靠指標(biāo)

REPLI-g 篩選試劑盒反應(yīng)的典型 DNA 產(chǎn)量為每 40 μl 反應(yīng) 8 μg。擴(kuò)增的DNA可直接用于各種下游應(yīng)用，包括基因分型（例如SNP、STR、缺失和插入）、終點(diǎn)PCR、定量實(shí)時(shí)PCR、微陣列和測(cè)序。與其他需要在冰上進(jìn)行反應(yīng)設(shè)置的全基因組擴(kuò)增程序不同，REPLI-g 篩選試劑盒使用室溫設(shè)置，處理時(shí)間僅為 20 分鐘，特別適合并行處理多個(gè)樣品。從不同的模板濃度中獲得均勻的DNA產(chǎn)量對(duì)于高通量應(yīng)用尤為重要，因?yàn)闊o(wú)需測(cè)量或調(diào)整DNA濃度即可進(jìn)行后續(xù)遺傳分析。平均產(chǎn)品長(zhǎng)度通常大于 10 kb，范圍在 2 kb 到 100 kb 之間

REPLI-g擴(kuò)增DNA的平均產(chǎn)物長(zhǎng)度通常超過(guò)10 kb，范圍在2 kb至100 kb之間，因此可以進(jìn)行復(fù)雜的限制性內(nèi)切酶分析和長(zhǎng)距離PCR等下游應(yīng)用。REPLI-g擴(kuò)增的DNA非常適合基因分型應(yīng)用，例如使用TaqMan®引物/探針組進(jìn)行SNP基因分型，測(cè)序和STR/微衛(wèi)星分析。

研究人員反饋

“在過(guò)去的兩年中，我們一直在多個(gè)項(xiàng)目中廣泛使用REPLI-g超快速迷你套件。使用 REPLI-g 試劑盒進(jìn)行的多次置換擴(kuò)增能夠以非常低的錯(cuò)誤率和高覆蓋率忠實(shí)地?cái)U(kuò)增所有 DNA 產(chǎn)物。我們使用該試劑盒的下游應(yīng)用通常包括NGS，但也包括qPCR和微陣列。此外，我們正在努力在微流體或芯片實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)中實(shí)施這項(xiàng)技術(shù)，因?yàn)樵摲椒ú恍枰獜?fù)雜的熱循環(huán)程序。 范蓉博士，美國(guó)耶魯大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程助理教授。

成功用于二代測(cè)序

許多出版物已經(jīng)證明了REPLI-g擴(kuò)增DNA在下一代測(cè)序（NGS）應(yīng)用中的成功應(yīng)用，從腫*細(xì)胞的外顯子組和全基因組測(cè)序到宏基因組學(xué)研究，再到單細(xì)胞分析（有關(guān)在NGS中成功使用REPLI-g的一系列新出版物，請(qǐng)參閱我們的WGA資源頁(yè)面).由于全基因組擴(kuò)增DNA在NGS和陣列應(yīng)用中的使用一直存在爭(zhēng)議，我們檢測(cè)到可能影響在這些下游應(yīng)用中使用擴(kuò)增DNA成功的潛在因素。我們確定輸入材料的質(zhì)量強(qiáng)烈影響下游NGS實(shí)驗(yàn)的成功。如果使用低質(zhì)量的DNA（例如，降解的DNA）或老化的組織材料，則所得擴(kuò)增的DNA可能無(wú)法給出可靠的結(jié)果（數(shù)據(jù)未顯示）。然而，WGA使用REPLI-g技術(shù)對(duì)完整細(xì)胞或未降解的純化DNA表明，NGS結(jié)果與純化的gDNA獲得的結(jié)果相當(dāng)?；蚪M位點(diǎn)序列的序列覆蓋率和比對(duì)比較表明WGA后垃圾DNA的水平最小化，而擴(kuò)增和基因組DNA的錯(cuò)誤率處于相似的百分比范圍內(nèi)。QIAseq FX 單細(xì)胞 RNA 和 QIAseq FX 單細(xì)胞 DNA 文庫(kù)試劑盒利用 REPLI-g MDA 反應(yīng)獲得高質(zhì)量的 NGS 文庫(kù)，當(dāng)起始處理 10 pg – 1 ng 的 RNA 或 DNA 時(shí)。

高保真全基因組擴(kuò)增

REPLI-g 技術(shù)可在整個(gè)基因組中提供高度均勻的 DNA 擴(kuò)增。Phi29聚合酶可以復(fù)制高達(dá)70 kb，而不會(huì)與基因組DNA模板解離。與基于 PCR 的全基因組擴(kuò)增 （WGA） 技術(shù)相比，Phi29 聚合酶具有 3'→5' 核酸外切酶校對(duì)活性，并且在復(fù)制過(guò)程中保持高達(dá) 1000 倍的保真度。試劑盒中提供的核酸外切酶抗性引物可確保DNA產(chǎn)物的高產(chǎn)量，并且WGA緩沖液系統(tǒng)針對(duì)超長(zhǎng)讀取長(zhǎng)度和無(wú)偏位點(diǎn)表示進(jìn)行了優(yōu)化。

REPLI-g 優(yōu)于基于 PCR 的 WGA 方法

傳統(tǒng)的基因組DNA擴(kuò)增方法包括創(chuàng)建EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞系的耗時(shí)過(guò)程，然后使用隨機(jī)或退化寡核苷*引發(fā)的PCR進(jìn)行全基因組擴(kuò)增。此外，其他供應(yīng)商通常使用的基于PCR的方法（例如DOP-PCR和PEP）會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增偽影，并且無(wú)法wan全覆蓋位點(diǎn)。在某些情況下，可能會(huì)產(chǎn)生長(zhǎng)度小于 1 kb 的 DNA，而這些 DNA 不能用于許多下游應(yīng)用。通常，由于使用了低保真酶Taq DNA聚合酶，生成的DNA具有更高的突變率，這可能導(dǎo)致容易出錯(cuò)的擴(kuò)增，例如導(dǎo)致單堿基對(duì)突變，STR收縮和擴(kuò)增。與這些缺點(diǎn)相反，REPLI-g在整個(gè)基因組中提供了高度均勻的擴(kuò)增，在擴(kuò)增過(guò)程中具有*小的基因座偏差和*小的突變率

Principle

放大原理

通常缺乏足夠數(shù)量的基因組DNA進(jìn)行基因組分析，從而限制了可以執(zhí)行的分析。全基因組擴(kuò)增（WGA）通過(guò)擴(kuò)增樣品中的整個(gè)基因組來(lái)克服這一限制，提供足夠的數(shù)量來(lái)對(duì)同一DNA樣品進(jìn)行所有分析。REPLI-g技術(shù)在整個(gè)基因組中提供高度均勻的DNA擴(kuò)增，并且序列偏差最小。

該方法基于多重位移擴(kuò)增（MDA）技術(shù)，該技術(shù)使用等溫基因組擴(kuò)增和du特的合成Phi 29聚合酶，能夠在不與基因組DNA模板解離的情況下復(fù)制高達(dá)100 kb.Phi 29聚合酶在存在核酸外切酶抗性引物的情況下使用，以實(shí)現(xiàn)DNA產(chǎn)物的高產(chǎn)量，具有3'→5'核酸外切酶校對(duì)活性，保真度比Taq聚合酶高1000倍，可在復(fù)制過(guò)程中保持高保真度。在du特、優(yōu)化的 REPLI-g 緩沖液系統(tǒng)的支持下，Phi 29 聚合酶可輕松求解發(fā)夾環(huán)等二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而防止聚合酶在擴(kuò)增過(guò)程中滑移、停止和解離。這使得能夠產(chǎn)生高達(dá)100 kb的DNA片段，而不會(huì)出現(xiàn)序列偏差。

DNA的堿性變性

基因組DNA在用于酶擴(kuò)增程序之前必須變性，這通常使用苛刻的方法完成，例如在高溫下孵育（熱孵育）或增加pH值（化學(xué)堿性孵育）。REPLI-g 試劑盒使用溫和的堿性孵育，允許均勻的 DNA 變性，具有非常低的 DNA 片段化或非堿性位點(diǎn)的生成。這導(dǎo)致擴(kuò)增的DNA具有非常高的完整性，并zui大化擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度，從而使基因組位點(diǎn)和序列得到均勻的表示。使用REPLI-g試劑盒，在后續(xù)下游應(yīng)用中可確保可靠的結(jié)果，沒有假陽(yáng)性或假陰性數(shù)據(jù)，這與使用熱誘導(dǎo)變性的其他WGA技術(shù)不同，WGA技術(shù)會(huì)破壞模板DNA，導(dǎo)致位點(diǎn)偏倚和代表性不足。

Procedure

REPLI-g Mini和MIDI試劑盒使用一種簡(jiǎn)單可靠的方法，從少量分離的靶基因組DNA或直接從全血、干血卡、血沉棕黃層和組織培養(yǎng)細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的基因組擴(kuò)增。加入裂解緩沖液，既裂解樣品材料又使DNA變性，然后進(jìn)行短時(shí)間的分鐘孵育。中和后，加入預(yù)混液（包括REPLI-g迷你DNA聚合酶），等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)在30°C下進(jìn)行過(guò)夜。

使用 REPLI-g 超快迷你試劑盒擴(kuò)增基因組 DNA 涉及 3 個(gè)基本步驟。首先，樣品（10 ng純化的基因組DNA，0.5μl全血或300個(gè)組織培養(yǎng)細(xì)胞）經(jīng)歷溫和的堿性變性，避免模板DNA的碎裂和損壞。接下來(lái)，將樣品中和，最后在30°C下與REPLI-g超快DNA聚合酶一起孵育。 擴(kuò)增的DNA在60分鐘后即可使用，無(wú)需進(jìn)一步純化。

非?？焖佟⒑?jiǎn)單和準(zhǔn)確的 REPLI-g 篩選方法能夠?qū)Χ鄠€(gè)基因組樣本進(jìn)行平行擴(kuò)增，如 REPLI-g 篩選手冊(cè)中所述。裂解樣品材料，并通過(guò)在1°C下與緩沖液SB65孵育使DNA變性。 通過(guò)冷卻至室溫來(lái)停止變性。加入緩沖液SB2和DNA聚合酶，等溫?cái)U(kuò)增進(jìn)行至少10小時(shí)或在30°C下過(guò)夜。

整個(gè)反應(yīng)設(shè)置在室溫下進(jìn)行，因此易于與液體處理儀器一起使用。96 個(gè)樣品的反應(yīng)設(shè)置僅需 20 分鐘，節(jié)省了專注于其他重要任務(wù)的時(shí)間。REPLI-g篩選試劑盒結(jié)合了許多功能，使其非常適合用于手動(dòng)或自動(dòng)高通量突變篩選，包括用于提高準(zhǔn)確性的大容量移液步驟，與96孔微孔板兼容，以及簡(jiǎn)化的方案，以實(shí)現(xiàn)快速簡(jiǎn)便的設(shè)置。

從我們完整的專用 REPLI-g 產(chǎn)品中選擇zuishihe您特定要求的 REPLI-g 試劑盒

Applications

l  REPLI-g擴(kuò)增的基因組可用于各種下游應(yīng)用，包括：

l  使用 TaqMan® 引物/探針組進(jìn)行 SNP 基因分型

l  基于 qPCR 和 PCR 的突變檢測(cè)

l  二代測(cè)序

l  可疑交易報(bào)告/微衛(wèi)星分析

l  桑格測(cè)序

l  RFLP 和 Southern 印跡分析

l  陣列技術(shù)，如比較基因組雜交

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